斑馬(ma)魚(yu)呼(hu)吸(xi)代謝及行(xing)為分(fen)析(xi)技術(shu)在生物醫學領域(yu)的應用

斑馬(ma)魚(yu)作(zuo)為壹(yi)種(zhong)模式動物，與人(ren)類共享高達(da) 70% 的基(ji)因(yin)組，保(bao)留了(le)多(duo)達(da) 80% 的人類疾(ji)病相(xiang)關(guan)蛋(dan)白(bai)。同樣作(zuo)為壹(yi)種(zhong)脊椎動物，斑馬(ma)魚(yu)與(yu)人(ren)類的組織(zhi)和發育(yu)生物學過(guo)程相(xiang)似(si)，故(gu)而針(zhen)對(dui)各(ge)種(zhong)癌(ai)癥(zheng)、肝病、血(xue)液疾(ji)病、心(xin)臟(zang)病和行(xing)為障礙的斑馬(ma)魚(yu)模型被(bei)建(jian)立(li)起(qi)來，斑馬(ma)魚(yu)進而(er)成(cheng)為了(le)基(ji)因(yin)表(biao)達(da)調(tiao)控(kong)、發病機理、藥物篩選(xuan)領域(yu)的主要模式動物，在生物醫學研(yan)究的地位越來越重(zhong)要(Patton et al., 2021)。

北京易(yi)科(ke)泰提(ti)供(gong)生物醫學領域(yu)斑馬(ma)魚(yu)呼(hu)吸(xi)代謝及行(xing)為分(fen)析(xi)的全套技術(shu)方案(an)，包(bao)括斑(ban)馬(ma)魚(yu)成(cheng)魚(yu)和魚卵、胚胎、幼魚的呼吸(xi)代謝測量、斑(ban)馬(ma)魚(yu)視頻跟(gen)蹤(zong)和行(xing)為分(fen)析(xi)及遊(you)泳能力評估。具(ju)體(ti)測量參(can)數及應用方向如下：

模塊1.成魚(yu)呼吸(xi)代謝測量

斑馬(ma)魚(yu)幼魚及成(cheng)魚(yu)呼吸(xi)代謝測量系(xi)統采(cai)用了(le)經(jing)典(dian)的間(jian)歇式(Intermittent flow/stop-flow)測量法(fa)，兼具(ju)高(gao)時(shi)間(jian)分(fen)辨(bian)率(lv)和(he)長期監測(ce)的特點。針(zhen)對(dui)斑(ban)馬(ma)魚(yu)體(ti)長短(duan)、體(ti)重輕(qing)、耗氧(yang)量低(di)等(deng)特點，采(cai)用了(le)小(xiao)型的呼吸(xi)室、水泵及非(fei)接(jie)觸式(shi)的光學(xue)氧(yang)氣傳感(gan)器(qi)，確(que)保(bao)獲得(de)可(ke)靠的耗氧(yang)曲線(xian)和(he)耗氧(yang)率(lv)數據(ju)。系(xi)統具(ju)備自(zi)動控制、測量和(he)分(fen)析(xi)的功能，放入(ru)斑(ban)馬(ma)魚(yu)樣品、設(she)置(zhi)間(jian)歇測量各(ge)階段的時(shi)間(jian)後，系(xi)統即(ji)可(ke)自(zi)動運行(xing)和(he)計(ji)算耗氧(yang)率(lv)，研(yan)究人(ren)員也可(ke)借助(zhu)配套軟件計(ji)算標準(zhun)代謝率(lv)(SMR)等(deng)數據(ju)。

易(yi)科(ke)泰公(gong)司(si)提(ti)供(gong)同時(shi)自(zi)主集(ji)成(cheng)的斑馬(ma)魚(yu)呼(hu)吸(xi)測量系(xi)統，可(ke)自(zi)動切換小(xiao)型水泵的開閉狀態(tai)，實(shi)現(xian)了(le)自(zi)動化間(jian)歇式測(ce)量。溶解(jie)氧(yang)監測(ce)采(cai)用了(le)熒(ying)光光纖(xian)氧(yang)氣傳感(gan)器(qi)，具(ju)備高靈敏(min)度(du)和高分(fen)辨(bian)率(lv)，並且易(yi)安裝(zhuang)、零維護。

模塊2. 魚卵(luan)、胚胎、幼魚高(gao)通量呼(hu)吸(xi)代謝測量

斑馬(ma)魚(yu)魚(yu)卵(luan)、胚胎、幼魚呼(hu)吸(xi)代謝測量由內置(zhi)氧(yang)氣感(gan)應貼(tie)片的24孔板(ban)、氧(yang)氣測量主(zhu)機、密封配件等(deng)組(zu)成，多個氧(yang)氣測量主(zhu)機可(ke)串聯(lian)組成(cheng)最(zui)多(duo)240個通道的高通量測(ce)量系(xi)統。

應用案(an)例(li)

因(yin)與哺乳(ru)動物具(ju)有(you)功(gong)能相(xiang)似(si)的肝臟(zang)細(xi)胞和(he)與人類相(xiang)似(si)的脂(zhi)質代謝，斑馬(ma)魚(yu)是(shi)研(yan)究肝病的有效(xiao)模型。南(nan)卡(ka)羅萊納醫科(ke)大(da)學的研(yan)究人(ren)員在KDSR（3-酮-二氫鞘(qiao)氨(an)醇(chun)還(hai)原(yuan)酶(mei)）突變體(ti)斑馬(ma)魚(yu)中(zhong)發(fa)現(xian)了(le)肝病表(biao)型過(guo)程，並對其(qi)發病機制進行(xing)了(le)研(yan)究。發(fa)現(xian)KDSR缺(que)失(shi)導(dao)致(zhi)鞘脂(zhi)補(bu)救(jiu)途徑的代償(chang)性(xing)激活和(he)磷酸(suan)鞘(qiao)氨醇(chun)(S1P)的積(ji)累，進而(er)導(dao)致(zhi)線(xian)粒(li)體(ti)活性(xing)增(zeng)加、氧(yang)化應激和內(nei)質網(wang)應激以(yi)及隨之而來(lai)的肝細(xi)胞損(sun)傷。因(yin)此KDSR可(ke)能是壹(yi)種(zhong)新(xin)的脂(zhi)肪變性(xing)和(he)肝損(sun)傷的遺傳風險因(yin)子(Park et al., 2019)。

該研(yan)究中(zhong)的耗氧(yang)實(shi)驗便采用了(le)斑(ban)馬(ma)魚(yu)魚(yu)卵(luan)、胚胎、幼魚呼(hu)吸(xi)代謝測量系(xi)統，實(shi)現(xian)了(le)幼魚耗氧(yang)率(lv)的高通量、快(kuai)速(su)測(ce)定(ding)。先(xian)在24孔板(ban)的每個孔(kong)加入(ru)125μL的卵水，在24℃下運行(xing)20min，之後放入(ru)3條幼魚，立(li)即(ji)使(shi)用封口(kou)膜(mo)密封和(he)矽(gui)膠(jiao)墊壓實(shi)。使(shi)用配套軟件記錄(lu)，每3min記錄(lu)壹(yi)次溶解(jie)氧(yang)濃度，持續30min。根據(ju)溶解(jie)氧(yang)濃度隨(sui)時(shi)間(jian)的變化計(ji)算了(le)耗氧(yang)率(lv)，下圖(tu)展示了(le)對(dui)照(zhao)組(zu)和突變體(ti)各(ge)3條幼魚的7次測(ce)量結果。發(fa)現(xian)相(xiang)比(bi)於(yu)對照(zhao)組(zu)斑馬(ma)魚(yu)，KDSR突變體(ti)的耗氧(yang)率(lv)有(you)所(suo)升高，該(gai)結果支(zhi)持KDSR突變體(ti)線(xian)粒(li)體(ti)β-氧(yang)化增強的結論(lun)。

模塊3. 高通量視頻跟(gen)蹤(zong)及行(xing)為分(fen)析(xi)

斑馬(ma)魚(yu)視頻跟(gen)蹤(zong)和行(xing)為分(fen)析(xi)系(xi)統由高清(qing)高(gao)幀頻工(gong)業相(xiang)機、斑馬(ma)魚(yu)行(xing)為分(fen)析(xi)軟件、斑馬(ma)魚(yu)活(huo)動室/池等(deng)組(zu)成。先(xian)錄(lu)制高質量斑馬(ma)魚(yu)活動視頻，再在計(ji)算機上使(shi)用專業行(xing)為分(fen)析(xi)軟件對視頻中(zhong)的斑馬(ma)魚(yu)進行(xing)分(fen)析(xi)，獲(huo)得(de)其隨時(shi)間(jian)變化的行為軌跡（X坐標(biao)和Y坐標(biao)；單條斑(ban)馬(ma)魚(yu)可(ke)做3D跟(gen)蹤(zong)，包括(kuo)X、Y、Z坐標(biao)），最後自(zi)動計(ji)算獲得(de)數十(shi)種(zhong)行(xing)為學(xue)參(can)數。基(ji)於(yu)機器視覺的斑馬(ma)魚(yu)行(xing)為分(fen)析(xi)系(xi)統，能夠對(dui)24孔、48孔、96孔板(ban)中的斑馬(ma)魚(yu)進行(xing)高(gao)通量行(xing)為采(cai)集(ji)和(he)分(fen)析(xi)，使(shi)研(yan)究者輕(qing)松(song)獲得(de)大量行(xing)為數據(ju)。

應用案(an)例(li)

    肌側索硬(ying)化(hua)(Amyotrophic lateral sclerosis，ALS) 是最(zui)常見(jian)的緩慢(man)進展(zhan)性(xing)運(yun)動神經元(yuan)疾(ji)病，以(yi)肢體(ti)和延(yan)髓上、下運動神經元(yuan)損(sun)害並存(cun)為特征，臨(lin)床(chuang)表(biao)現(xian)為進行(xing)性(xing)四(si)肢骨(gu)骼(ge)肌無力、肌束震(zhen)顫，並伴有肌張(zhang)力增(zeng)高(gao)、腱反射(she)亢(kang)進、病(bing)理征陽(yang)性(xing)，最(zui)終(zhong)呼吸(xi)衰竭(jie)死亡(wang)，患者平(ping)均生存(cun)期為3～5年。

    大部(bu)分(fen)ALS病例(li)為散發(fa)型，但仍(reng)有(you)約(yue)10%的病例為遺(yi)傳(chuan)型，由不同(tong)基(ji)因(yin)突變引起(qi)。超氧(yang)化物歧化(hua)酶1（SOD1）基(ji)因(yin)突變是主要致(zhi)病基(ji)因(yin)，約(yue)占遺傳型病(bing)例(li)的20%。SOD1在大(da)部(bu)分(fen)組織(zhi)中廣(guang)泛表(biao)達(da)，主(zhu)要參(can)與自(zi)由基(ji)清(qing)除。盡(jin)管SOD1相(xiang)關(guan)的ALS發病(bing)機制已有(you)報(bao)道，但SOD1突變誘導(dao)的病理學機制尚不得(de)而知(zhi)。為此(ci)，高(gao)麗(li)大學醫學院的研(yan)究人(ren)員構建(jian)了(le)能夠在成(cheng)熟(shu)少(shao)突(tu)膠(jiao)質細(xi)胞中(zhong)表(biao)達(da)攜(xie)帶G93A突變的人SOD1的轉基(ji)因(yin)斑馬(ma)魚(yu)，並考(kao)察了(le)其(qi)病理特征和(he)對(dui)運動神經元(yuan)的影響(Kim et al., 2019)。

該研(yan)究中(zhong)的行為分(fen)析(xi)使(shi)用了(le)斑(ban)馬(ma)魚(yu)視頻跟(gen)蹤(zong)和行(xing)為分(fen)析(xi)系(xi)統：將(jiang)成(cheng)年(nian)斑馬(ma)魚(yu)逐(zhu)條(tiao)轉移(yi)至(zhi)1L的水箱(xiang)中，令(ling)其(qi)適(shi)應30min後，使(shi)用攝(she)像(xiang)機從側面(mian)記錄(lu)斑(ban)馬(ma)魚(yu)的遊(you)泳行為，獲得(de)了(le)平(ping)均遊(you)泳速度(du)、非活動時(shi)間(jian)（休息(xi)時(shi)間(jian)）、在水箱(xiang)底(di)部(bu)花費的時(shi)間(jian)等(deng)參(can)數，並對感(gan)興(xing)趣的行為（包括(kuo)靜止(zhi)、異常活(huo)動、趨觸性(xing)和(he)運(yun)動缺(que)陷(xian)）的時(shi)間(jian)進行(xing)了(le)統(tong)計(ji)分(fen)析(xi)。

發現(xian)在8個月之前，SOD1突變斑馬(ma)魚(yu)和(he)野生型斑(ban)馬(ma)魚(yu)的遊(you)泳速度(du)無明(ming)顯(xian)差(cha)異(yi)；在早(zao)期癥(zheng)狀階段（8個月-11個月），SOD1突變體(ti)斑馬(ma)魚(yu)的平(ping)均遊(you)泳速度(du)有所(suo)增加；直到疾(ji)病晚(wan)期SOD1突變斑馬(ma)魚(yu)遊(you)泳速度(du)降低。且在早(zao)期癥(zheng)狀階段，大部(bu)分(fen)SOD1突變斑馬(ma)魚(yu)表(biao)現(xian)出焦慮(lv)樣行為失(shi)常，包(bao)括趨觸性(xing)、靜(jing)止(zhi)和異(yi)常活(huo)動以(yi)及輕(qing)微(wei)的運動缺(que)陷(xian)。除此(ci)之外(wai)，在14個月大的時(shi)候，SOD1突變斑馬(ma)魚(yu)休(xiu)息(xi)的時(shi)間(jian)占比更大，表(biao)明(ming)其(qi)運動活性(xing)降(jiang)低(di)。

模塊4. 遊(you)泳能力

        l 斑馬(ma)魚(yu)遊(you)泳能力研(yan)究測(ce)試(shi)系(xi)統為壹站(zhan)式方案(an)，包(bao)括斑馬(ma)魚(yu)專用小型遊(you)泳室和(he)自(zi)動化水流速(su)度(du)控制、校準(zhun)的所(suo)有軟硬件。系(xi)統提(ti)供(gong)適(shi)合斑馬(ma)魚(yu)遊(you)泳匹配的高精(jing)度(du)控(kong)制水流，水流調(tiao)節速度(du)為0.7 - 50 cm/s。

該系(xi)統能夠實(shi)現(xian)水流速(su)度(du)的校準(zhun)、轉換、校正和(he)控(kong)制，單位和方式(shi)任選(xuan)（如以(yi)BL/sec為單位的遊(you)泳速度(du)），可(ke)對Solid Blocking效(xiao)應（斑馬(ma)魚(yu)自(zi)身阻(zu)礙(ai)水流引起(qi)的水流速(su)度(du)變化）進行(xing)校正，並且能夠創(chuang)建自(zi)動化的用戶(hu)自(zi)定(ding)義(yi)程序。

應用案(an)例(li)

心(xin)肌病是(shi)指(zhi)心(xin)肌在缺(que)血(xue)、高(gao)血壓等(deng)外(wai)在壓力(li)和基(ji)因(yin)突變等(deng)內(nei)在壓力(li)的作(zuo)用下發生結構改(gai)變，最終(zhong)導(dao)致(zhi)心(xin)力衰竭(jie)的心(xin)臟(zang)疾(ji)病。心(xin)肌病包(bao)括(kuo)肥厚性(xing)心(xin)肌病(HCM)、擴張(zhang)性(xing)心(xin)肌病(DCM)和限制性(xing)心(xin)肌病(RCM)等(deng)類(lei)型。30%~50%的DCM患者有(you)基(ji)因(yin)突變和家(jia)族(zu)遺(yi)傳背(bei)景(jing)；80%~90%為常染(ran)色體(ti)顯(xian)性(xing)遺(yi)傳(chuan)。高效(xiao)、高通量的動物模型對(dui)於(yu)評估相(xiang)關(guan)候(hou)選(xuan)基(ji)因(yin)、加快新(xin)基(ji)因(yin)發現(xian)過(guo)程具(ju)有(you)重(zhong)要作(zuo)用。

美國(guo)梅(mei)奧(ao)醫學醫院的研(yan)究人(ren)員利(li)用基(ji)因(yin)組編(bian)輯技術(shu)得(de)到了(le)已(yi)知心(xin)肌病基(ji)因(yin)Gatad1被敲除的斑馬(ma)魚(yu)(Yang et al., 2016)。在遊(you)泳能力測(ce)試環節，為增(zeng)加成年(nian)斑馬(ma)魚(yu)對(dui)心(xin)力衰竭(jie)的易(yi)感(gan)性(xing)，對(dui)野(ye)生型和(he)突(tu)變斑馬(ma)魚(yu)同(tong)時(shi)進行(xing)高(gao)膽固(gu)醇(chun)飲(yin)食和乙醇(chun)處理。饑餓(e)24小時(shi)後，將斑(ban)馬(ma)魚(yu)放入(ru)遊(you)泳室。以(yi)9 cm/s（200rpm）的速度適(shi)應20min後，水流速(su)度(du)以(yi)8.66 cm/s (100 rpm) (Ui)的增量遞(di)增(zeng)，每個速(su)度梯(ti)度(du)持續2.5min（Tii）。當(dang)斑馬(ma)魚(yu)力竭(jie)，無法從下遊(you)恢復(fu)遊(you)泳時(shi)，記錄(lu)最(zui)大遊(you)泳速度(du)（Uii）和測(ce)試的總(zong)時(shi)間(jian)（Ti）。之後使(shi)其恢復(fu)30min，測量體(ti)長BL。臨界(jie)遊(you)泳速度(du)根據以(yi)下公(gong)式(shi)計(ji)算：

上述(shu)測量結果顯(xian)示突變體(ti)的遊(you)泳能力相(xiang)比(bi)於(yu)同齡野(ye)生型顯(xian)著(zhu)降(jiang)低(di)，並且突(tu)變斑馬(ma)魚(yu)在大(da)約(yue)7個月大時(shi)開始死亡(wang)，與同(tong)齡野(ye)生型對(dui)照(zhao)魚(yu)相(xiang)比(bi)，其(qi)存(cun)活率(lv)顯(xian)著(zhu)下降。該(gai)結果支(zhi)持GATAD1是DCM誘發(fa)基(ji)因(yin)的結論(lun)。

模塊5. 身體(ti)適(shi)應力(li)（physical fitness）評價

    斑馬(ma)魚(yu)身(shen)體(ti)適(shi)應力(li)（physical fitness）評價系(xi)統將(jiang)遊(you)泳能力研(yan)究測(ce)試(shi)功(gong)能和呼(hu)吸(xi)代謝測量功(gong)能相(xiang)結合，通過(guo)測(ce)定(ding)遊(you)泳速度(du)-耗氧(yang)率(lv)的變化曲線(xian)評估斑(ban)馬(ma)的體(ti)力和(he)身體(ti)適(shi)應性(xing)。

應用案(an)例(li)

鋅是(shi)人體(ti)必需的微量營(ying)養(yang)成分(fen)，在酶(mei)活性(xing)、免(mian)疫(yi)功能、神經功(gong)能和繁(fan)殖(zhi)等(deng)生物過(guo)程中起(qi)到重(zhong)要作(zuo)用。孕婦(fu)缺(que)鋅(xin)是(shi)壹個(ge)公(gong)共衛(wei)生問題(ti)：據估(gu)計(ji)高達(da)82%的孕婦鋅攝(she)入(ru)量不(bu)足。缺(que)鋅(xin)既與早(zao)產(chan)、低(di)出生體(ti)重和(he)先(xian)天(tian)性(xing)畸形(xing)的增加有關(guan)，也與(yu)後代葡萄(tao)糖(tang)耐受(shou)性(xing)受(shou)損(sun)、糖尿(niao)病易(yi)感(gan)性(xing)增(zeng)加以(yi)及學(xue)習(xi)和(he)記憶受(shou)損(sun)有關(guan)。

和人(ren)類壹樣，斑馬(ma)魚(yu)也(ye)需要攝(she)入(ru)鋅(xin)，並且有(you)類似(si)的調(tiao)節機制來維(wei)持鋅的動態(tai)平(ping)衡。因(yin)此，美國(guo)俄(e)勒(le)岡州立(li)大(da)學的研(yan)究人(ren)員專門為斑(ban)馬(ma)魚(yu)開(kai)發(fa)了(le)壹(yi)種(zhong)缺(que)鋅(xin)飼(si)料(liao)，用其飼(si)養(yang)成年(nian)斑馬(ma)魚(yu)導(dao)致(zhi)其缺(que)鋅(xin)。研(yan)究結果表(biao)明(ming)親代缺(que)鋅(xin)會(hui)使(shi)其(qi)後代也缺(que)鋅(xin)，並對後代產(chan)生死亡(wang)率(lv)顯(xian)著(zhu)增(zeng)加、體(ti)力活(huo)動減少(shao)等(deng)不(bu)利(li)影(ying)響(xiang)。缺(que)鋅(xin)斑(ban)馬(ma)魚(yu)胚(pei)胎中(zhong)調(tiao)節金屬(shu)內(nei)穩態(tai)的基(ji)因(yin)（包括(kuo)鋅轉(zhuan)運(yun)體(ti)、金屬(shu)調(tiao)控(kong)轉錄(lu)因(yin)子）表(biao)達(da)發(fa)生了(le)變化，與糖尿(niao)病(bing)和(he)胰腺(xian)發育(yu)相(xiang)關(guan)的基(ji)因(yin)表(biao)達(da)有(you)所(suo)下降。缺(que)鋅(xin)子(zi)代的DNA甲基(ji)轉(zhuan)移(yi)酶(mei)表(biao)達(da)下降，意(yi)味(wei)著親代缺(que)鋅(xin)可(ke)能導(dao)致(zhi)其子(zi)代的表(biao)觀(guan)遺傳(chuan)圖(tu)譜發生改(gai)變。該研(yan)究提(ti)供(gong)了(le)數據(ju)支(zhi)持，證(zheng)明(ming)了(le)缺(que)鋅(xin)孕(yun)婦補(bu)充(chong)鋅是有(you)益(Beaver et al., 2017)。

該研(yan)究測(ce)量了(le)不(bu)同水流速(su)度(du)下的成年斑馬(ma)魚(yu)氧(yang)氣消耗率(lv)，以(yi)評估其(qi)身體(ti)適(shi)應力(li)：以(yi)8條成(cheng)年斑馬(ma)魚(yu)為壹組(zu)，放入(ru)2.5L的遊(you)泳儀，每10min測量壹(yi)次(ci)。采用間(jian)歇式的測量方式(shi)，具(ju)體(ti)時(shi)間(jian)設(she)置(zhi)為60s等(deng)待(dai)、240s沖洗(xi)、300s測量。先(xian)使(shi)斑(ban)馬(ma)魚(yu)適(shi)應30min，隨後的30min使(shi)其(qi)在5cm/s（108rpm）的水流速(su)度(du)下自(zi)由遊(you)動，接(jie)著分(fen)別將(jiang)水流速(su)度(du)設(she)置(zhi)成(cheng)25 cm/s（504 rpm）和45cm/s（901 rpm），最後恢復(fu)至(zhi)5cm/s（108rpm）的水流速(su)度(du)。每個流(liu)速梯(ti)度(du)持續30min。取線(xian)性(xing)相(xiang)關(guan)性(xing)高(gao)於(yu)0.8的數據(ju)點(dian)進行(xing)分(fen)析(xi)。

如下圖(tu)，在適(shi)應階段，對照(zhao)組(zu)和缺(que)鋅(xin)斑(ban)馬(ma)魚(yu)的耗氧(yang)率(lv)沒(mei)有差異。隨(sui)著水流速(su)度(du)的提(ti)升，缺(que)鋅(xin)斑(ban)馬(ma)魚(yu)遊(you)動更劇烈，導(dao)致(zhi)其耗氧(yang)率(lv)顯(xian)著(zhu)升高。重(zhong)要的是斑馬(ma)魚(yu)表(biao)現(xian)出顯(xian)著(zhu)的飲食效(xiao)應，即(ji)缺(que)鋅(xin)斑(ban)馬(ma)魚(yu)比(bi)對(dui)照(zhao)組(zu)消耗更多的氧(yang)氣——在最(zui)高水流速(su)度(du)（901rpm）時(shi)缺(que)鋅(xin)斑(ban)馬(ma)魚(yu)要多消(xiao)耗28%的氧(yang)氣。因(yin)此，缺(que)鋅(xin)導(dao)致(zhi)斑馬(ma)魚(yu)身(shen)體(ti)適(shi)應度(du)（physical fitness）降低(di)。

參(can)考(kao)論(lun)文(wen)

1.Beaver, L.M., Nkrumah-Elie, Y.M., Truong, L., Barton, C.L., Knecht, A.L., Gonnerman, G.D., Wong, C.P., Tanguay, R.L., and Ho, E. (2017). Adverse effects of parental zinc deficiency on metal homeostasis and embryonic development in a zebrafish model. The Journal of Nutritional Biochemistry 43, 78–87. 

2.Kim, S., Chung, A., Na, J.E., Lee, S.J., Jeong, S.H., Kim, E., Sun, W., Rhyu, I.J., and Park, H. (2019). Myelin degeneration induced by mutant superoxide dismutase 1 accumulation promotes amyotrophic lateral sclerosis. Glia. 23669. 

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